Partnerskapet er effektivt, men snart blir de ofre for et kaos utløst av en gryende kriminell mesterhjerne kjent for de livredde innbyggerne i Gotham som Jokeren. I "The Dark Knight" gjenforenes regissør Christopher Nolan og hovedrolleinnehaver Christian Bale, som igjen spiller Batman/Bruce Wayne. Oscar-nominerte Heath Ledger ("Brokeback Mountain") spiller erkeskurken Jokeren, og Aaron Eckhart spiller statsadvokat Harvey Dent. Maggie Gyllenhaal er med som Rachel Dawes. Andre gamle kjente fra "Batman Begins" er Gary Oldman som politiinspektør Jim Gordon, Oscar-vinner Michael Caine ("Siderhusreglene") som Alfred og Oscar-vinner Morgan Freeman ("Million Dollar Baby") som Lucius Fox.